日本黄色三级视频-日本黄色片一级-日本黄色片www-日本黄色免费在线视频-草草影院浮力-草草影视在线观看

電話咨詢:
010-50973130
技術文章
當前位置:首頁 > 技術文章 > 基因組DNA提取試劑盒簡介

基因組DNA提取試劑盒簡介

更新時間:2010-01-11  |  點擊率:6389

基因組DNA提取試劑盒簡介:
DNA是遺傳信息的載體,是重要的生物信息分子,是分子生物
學研究的主要對象,為了進行測序、雜交、基因表達、文庫構建
等試驗,獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前
提,因此基因組DNA的提取也是分子生物學試驗技術中重要、
基本的操作之一。
Solarbio公司提供各種不同樣品基因組DNA提取試劑盒,如植物、
動物、細菌、細胞、血液、酵母等基因組DNA提取試劑盒。所提
取的基因組純度高,片段大小在50kb左右。用戶可根據需要選用
不同的試劑盒來進行不同樣品的抽提。
一、基因組DNA提取的原則:
1、保證核酸一級結構的完整性(因為遺傳信息全部儲存在核酸一級
結構中,故完整的一級結構是保證核酸結構與功能研究的基礎)。
2、排除其它分子(如蛋白質、多糖、脂類、有機溶劑等)的污染,
使下游試驗順利進行。
二、基因組DNA提取的原理和方法:
DNA與組蛋白構成核小體,核小體纏繞成中空的螺旋管狀結構,
即染色絲,染色絲再與許多非組蛋白形成染色體。染色體存在于
細胞核中,外有核膜及胞膜。從組織中提取DNA必須先將組織分
散成單個細胞,然后破碎胞膜及核膜,使染色體釋放出來,同時
去除與DNA結合的組蛋白及非組蛋白。
1、樣品預處理
從各種不同來源的樣品(如細菌、酵母、血液、動植物組織細胞等)
中提取高純度的基因組DNA,因細胞結構及其成分不同,樣品預處
理方式也不同,以下簡單介紹常用提取材料的預處理方式,若需詳
細了解,請參考本公司各基因組DNA提取試劑盒說明書。
部分樣品預處理方式:
植物材料 液氮研磨
動物材料 勻漿、液氮研磨
培養細胞 蛋白酶K處理
細菌 溶菌酶破壁
酵母 破壁酶破壁、玻璃珠研磨
血液 紅細胞裂解液去紅細胞
2、細胞裂解
CTAB法:適用于植物組織、真菌等。
CTAB是一種陽離子去污劑,可溶解細胞膜,并與核酸形成復合
物。該復合物在高鹽溶液中(>0.7M NaCl)是可溶的,通過有機溶
劑抽提,去除蛋白、多糖、多酚等雜質后加入乙醇沉淀即可使核
酸分離出來。
SDS法:適用于細菌、血液、酵母、動物組織、細胞等。
SDS是一種陰離子去污劑,可溶解細胞膜,裂解細胞,使蛋白質
變性、染色體解體。
其它裂解方法:
物理方式:機械剪切、超聲波破碎、研磨勻漿等
化學方式:異硫氰酸胍、堿裂解等
酶法:蛋白酶K
3、DNA分離純化
純化要求:核酸樣品中不應存在對酶(如核酸內切酶、DNA聚合酶
等)有抑制作用的成分。其它生物大分子如蛋白質、多糖、多酚和
脂類分子等污染應降低到低程度。排除其它核酸分子的污染,
如提DNA時應去除RNA,反之亦然。
純化方法:細胞破碎后,常使用吸附材料結合方法去除雜質和純
化DNA,主要有硅基質材料、陰離子交換樹脂和磁珠等。因硅基
質材料可特異吸附核酸DNA,使用方便、快捷,不需要使用有毒
溶劑如酚、氯仿等,使得提取基因組像過濾一樣簡單,因此硅基
質材料成為大規模分離純化DNA的通用方法。
硅基質材料吸附核酸的原理:主要利用DNA在高鹽低pH值環境下
與硅基質材料相結合,在低鹽高pH值環境下與硅基質材料脫離的
特征。其機理可能是高濃度鹽離子破壞了硅基質水分子結構,形
成陽離子橋,當鹽被清除后,再水化的硅石破壞了基質和DNA之
間的吸引力,因而DNA從硅基質上被洗脫下來。
注意事項:盡量簡化操作步驟,縮短提取過程,以減少各種有害
因素對核酸的破壞。
減少化學物質對DNA的降解,為避免過酸、過堿對DNA雙鏈中磷
酸二酯鍵的破壞,操作多在pH值4.0-10.0的條件下進行。
防止基因組DNA的生物降解,主要是DNase降解基因組DNA,
DNase需二價金屬陽離子如Mg2+等的激活,可用EDTA等金屬離
子螯和劑螯和Mg2+以抑制DNase的活性。
減少物理因素對DNA的降解,物理降解因素主要包括機械剪切力
(如劇烈振蕩、攪拌等),細胞突然置于低滲液中導致的細胞爆炸式
破裂,DNase大量釋放,樣品反復凍融和高溫等。
4、DNA洗脫收集
DNA的洗脫效率取決于以下重要因素:
洗脫液成分:采用硅基質膜吸附的DNA,可將DNA在低鹽高pH
值條件下洗脫下來。pH值在7.0-8.5之間洗脫效率較高,pH值低
于7.0則洗脫效率很低。一般基因組提取試劑盒中的洗脫緩沖液就
是TE(pH8.0),既為DNA從硅基質膜上洗脫下來提供良好的pH環
境,其中的EDTA又能保證DNA不被DNase降解,同時由于EDTA
濃度非常低,對核酸內切酶、DNA聚合酶的影響非常微弱,不影
響后續實驗,可放心使用。
洗脫液體積:當洗脫液體積小于30ul時,洗脫效率很低且不穩
定;當洗脫液體積在50-200ul時,洗脫效率穩定在80-90﹪,并
可保證得到大產量,因此洗脫液體積不能小于30ul。

加洗脫液部位:100-200ul洗脫液能*覆蓋硅基質膜,DNA的
洗脫量可得到保證,但當洗脫液體積較少如30-50ul時,須在硅基
質膜中間部分懸空滴加洗脫液,以確保少量的洗脫液能*覆蓋
硅膠膜。
洗脫液的溫度:在加洗脫液之前,先將洗脫液在60-75℃水浴中
預熱10分鐘,可有效提高DNA的洗脫效率。
洗脫時間和次數:加入預熱的洗脫液后,可在室溫放置2-5分鐘使
DNA*溶解在洗脫液里通過離心而洗脫下來。同時可進行二次或
三次洗脫,即將前次洗脫下來的洗脫液再上柱、離心,使前次沒有
洗脫下來的DNA再次溶解在洗脫液里,從而提高DNA的產量。
5、DNA的定量及檢測
提取得到的DNA片段需從分子質量、濃度、純度等方面進行檢
測,從而判斷DNA質量。
用瓊脂糖凝膠電泳分析DNA分子質量:得到的基因組DNA片段的
大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。Solarbio
公司的基因組DNA提取試劑盒提取的不同材料基因組DNA片段大
小一般在50kb左右,能很好地滿足后續試驗的要求。
通常用瓊脂糖凝膠電泳分析DNA分子質量時,以溴酚藍為示蹤染
料,EB染色,紫外觀察,并與DNA分子量標準對照即可判斷所提
DNA的平均分子量。高質量的基因組DNA應顯示為單一條帶,如
DNA降解則表現為彌散條帶。
用紫外分光光度計檢測DNA濃度和純度:
濃度測定:DNA在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當于大約
50ug/ml雙鏈DNA。
以下簡單介紹OD260的測定方法:
所提基因組DNA樣品=100ul
進行OD260值測定的待測樣品=20ul所提基因組DNA樣品+180ul
TE=200ul
DNA稀釋倍數=200ul/20ul=10倍
如200ul待測樣品OD260值=0.2
待測樣品濃度(即100ul基因組DNA樣品濃度)=50ug/ml×OD260值
×稀釋倍數=100 ug/ml
所提100ul基因組DNA樣品總量=100 ug/ml×100ul=10ug DNA
純度測定:一般用OD260/OD280值檢測DNA樣品的純度。正常
OD260/OD280值約為1.7-1.9,說明DNA純度較好;若OD260/OD280
值小于1.7,說明可能有蛋白污染;若OD260/OD280值大于2.0,說
明可能有RNA污染或DNA已經降解。
注:因為pH值和離子會影響光吸收值,因此洗脫時如不使用洗脫
緩沖液,而使用去離子水,OD260/OD280值會偏低,但并不表示純
度低。
6、DNA的儲存
儲存溶液:DNA為兩性解離分子,在堿性條件下較穩定,因此一
般用TE(pH8.0)保存。TE的成分為:10 mM Tris-HCl(Tris與鹽酸
形成強的緩沖對);1 mM EDTA(乙二胺四乙酸,能螯合二價金屬
陽離子,抑制DNase的活性);pH8.0(堿性條件可減少DNA的脫氨
作用,防止降解)。ddH2O的正常pH值為7.0,可作為DNA的儲存
液,但有些實驗室制備的ddH2O呈酸性(pH值小于7.0),這不僅影
響DNA的洗脫效率,而且導致長時間保存的DNA容易發生降解。
因此建議用TE作為DNA的長期儲存液。
儲存條件:為避免DNA降解,提取的DNA應*行分裝,然后置
于-20℃或-70℃保存,同時注意避免反復凍融造成DNA降解。




亚欧视频在线| 成人a级高清视频在线观看| 国产高清视频免费| 日韩专区第一页| 欧美日本二区| 美女被草网站| 天天做日日爱夜夜爽| 一级毛片看真人在线视频| 国产精品免费久久| 日韩中文字幕在线观看视频| 夜夜操网| 九九免费高清在线观看视频| 精品国产一区二区三区免费| 久草免费在线观看| 成人免费网站久久久| 九九久久99| 国产精品自拍在线观看| 九九精品在线播放| 999精品在线| 青青青草影院| 一级毛片视频在线观看| 九九精品在线播放| 日本免费看视频| 午夜在线观看视频免费 成人| 精品视频在线看 | 99久久精品国产国产毛片| a级毛片免费全部播放| 国产国语对白一级毛片| 亚欧乱色一区二区三区| 97视频免费在线| 国产91精品一区| 精品国产一区二区三区久久久蜜臀| 精品国产一区二区三区久| 99色视频在线| 亚洲天堂免费| 精品毛片视频| 九九免费高清在线观看视频| 99色精品| 精品视频在线观看一区二区| 午夜在线影院| 国产精品1024永久免费视频 | 四虎精品在线观看| 国产伦精品一区二区三区在线观看| 久久久成人影院| 青青青草影院| 国产不卡在线看| a级黄色毛片免费播放视频 | 成人a大片高清在线观看| 亚洲天堂在线播放| 日韩字幕在线| 你懂的日韩| 精品视频一区二区三区| 午夜欧美福利| 国产伦精品一区二区三区在线观看| 国产不卡在线播放| 午夜欧美成人久久久久久| 麻豆系列国产剧在线观看| 国产视频一区二区在线播放| 亚洲女人国产香蕉久久精品| 日韩免费片| 欧美激情一区二区三区视频| 日日夜人人澡人人澡人人看免| 好男人天堂网 久久精品国产这里是免费 国产精品成人一区二区 男人天堂网2021 男人的天堂在线观看 丁香六月综合激情 | 黄视频网站在线观看| 午夜欧美成人久久久久久| 久久精品欧美一区二区| 日本在线www| 美女免费精品高清毛片在线视| 91麻豆精品国产自产在线| 日韩avdvd| 中文字幕Aⅴ资源网| 精品视频在线观看一区二区三区| 亚欧视频在线| 日本伦理黄色大片在线观看网站| 青草国产在线| 精品视频在线观看视频免费视频| 一级毛片视频免费| 黄视频网站在线观看| 欧美激情一区二区三区在线播放| 午夜在线亚洲| 99热精品在线| 国产麻豆精品高清在线播放| 日日日夜夜操| 九九久久99综合一区二区| 青青青草影院| 日本伦理黄色大片在线观看网站| 午夜欧美成人久久久久久| 国产网站免费视频| 久久精品店| 午夜家庭影院| 你懂的在线观看视频| 欧美一区二区三区在线观看| 青青久久精品| 欧美18性精品| 99久久精品国产高清一区二区| 一级毛片视频在线观看| 国产麻豆精品高清在线播放| 日韩专区第一页| 91麻豆国产| 日韩中文字幕在线观看视频| 日本久久久久久久 97久久精品一区二区三区 狠狠色噜噜狠狠狠狠97 日日干综合 五月天婷婷在线观看高清 九色福利视频 | 亚洲精品久久久中文字| 欧美1区| 四虎影视久久| 好男人天堂网 久久精品国产这里是免费 国产精品成人一区二区 男人天堂网2021 男人的天堂在线观看 丁香六月综合激情 | 欧美夜夜骑 青草视频在线观看完整版 久久精品99无色码中文字幕 欧美日韩一区二区在线观看视频 欧美中文字幕在线视频 www.99精品 香蕉视频久久 | 精品国产一区二区三区精东影业| 日韩一级黄色片| 免费国产在线视频| 国产精品12| 亚洲www美色| 国产网站麻豆精品视频| 天堂网中文字幕| 日韩在线观看免费| 青青久久精品国产免费看| 欧美日本免费| 国产福利免费视频| 日本免费乱理伦片在线观看2018| 欧美一区二区三区在线观看| 久草免费资源| 亚洲天堂在线播放| 亚洲天堂在线播放| 日韩在线观看视频黄| 日本久久久久久久 97久久精品一区二区三区 狠狠色噜噜狠狠狠狠97 日日干综合 五月天婷婷在线观看高清 九色福利视频 | 欧美18性精品| 成人在激情在线视频| 国产高清在线精品一区二区| 韩国毛片 免费| 香蕉视频三级| 国产一区国产二区国产三区| 成人高清视频在线观看| 日本在线不卡视频| 国产欧美精品| 99久久精品国产高清一区二区 | 国产a视频| 色综合久久天天综合绕观看| 成人影视在线播放| 精品国产亚洲人成在线| 精品在线免费播放| 99久久精品国产高清一区二区| 亚洲天堂免费观看| 亚洲爆爽| 黄色短视频网站| 国产麻豆精品免费密入口| 国产a视频| 一级女性大黄生活片免费| 精品国产亚洲一区二区三区| 国产视频久久久久| 日本在线www| 999精品视频在线| 可以免费在线看黄的网站| 日韩中文字幕一区二区不卡| 国产麻豆精品hdvideoss| 国产视频久久久| 国产91丝袜在线播放0| 日韩专区一区| 免费国产在线视频| 国产综合成人观看在线| 欧美激情一区二区三区在线| 久久成人亚洲| 日本在线不卡视频| 亚洲不卡一区二区三区在线 | 国产精品自拍在线| 精品国产亚一区二区三区| 国产一区二区精品久| 免费一级片网站| 四虎影视库| 欧美日本免费| 国产视频一区二区在线播放| 天天做人人爱夜夜爽2020毛片| 国产视频一区二区三区四区| 青青青草影院 | 久久国产影院| 天天色色网| 台湾美女古装一级毛片| 91麻豆国产福利精品| 精品久久久久久综合网| 青青青草影院 | 精品国产香蕉伊思人在线又爽又黄| 日韩中文字幕在线播放| 天天色成人| 天天做日日爱| 国产伦久视频免费观看 视频 | 天天做日日爱夜夜爽| 99久久网站| 天天做人人爱夜夜爽2020| 黄视频网站在线观看| 亚欧成人乱码一区二区| 国产伦久视频免费观看 视频 | 韩国三级视频在线观看| 可以免费在线看黄的网站| 国产激情视频在线观看| 美女被草网站| 天天做日日爱| 色综合久久天天综线观看| 一本高清在线| 色综合久久天天综合绕观看| 日本免费看视频| 亚洲女人国产香蕉久久精品| 黄视频网站在线观看|