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用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法

更新時間:2012-06-04  |  點擊率:3126

 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:

1. 包被:用0.05M pH9.5碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含
量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,
4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分
鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,
置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽
性對照孔)。
3. 加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的
稀釋度)0.1ml,37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液
0.1ml,37℃孵育10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏
色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色
的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測
儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)
零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為
陽性。

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