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堿性磷酸酶(AKP/ALP) 活性測定試劑盒 說明 技術文章

更新時間:2019-06-10  |  點擊率:8934
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堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,AKP/ALP) 活性測定試劑盒

商品貨號:QS2002
英文名稱:Tissue and Blood Alkaline Phosphatase(AKP/ALP) Assay Kit
別名:組織及血液堿性磷酸酶試劑盒 AKP/ALP Kit 組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)試劑盒
檢測方法:常量法

 

商品貨號:商品品牌:規格基本售價選擇規格
QS2002-50管/24樣索橋生物50管/24樣¥160.00元 

 

  • 產品詳細介紹
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測定意義:                           

AKP/ALP是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。

測定原理:

在堿性環境中,AKP/ALP催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與4-氨基安替比林和六氰合鐵酸鉀反應紅色亞醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通過測定510 nm吸光度增加速率,來計算AKP活性。

  • 產品說明書

貨號: QS2002             規格:50管/24樣

 

  堿性磷酸酶(alkaline phosphatase ,AKP/ALP) 活性測定試劑盒說明書

          可見分光光度法

 

注意:正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化 合物。AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。

測定原理:

在堿性環境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與 4-氨基安替比林和六氰合鐵酸鉀反應紅色亞醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通過測定 510 nm 吸光度增加速率,來計算 AKP 活性。

自備實驗用品及儀器:

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體×1 瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體×1 瓶,4℃避光保存。

試劑四:液體×1 瓶,4℃避光保存,未變成藍綠色之前均可使用。

標準品:液體×1 支(EP 管中),2 μ mol/mL 酚標準液,4℃保存。

粗酶液提取:

1. 組織:

按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加 入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿,4℃、8000g 離心 10min,取上清液待測。

2. 細菌或細胞:

按照細菌或細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建 議 500 萬細胞加入 1mL 試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒, 總時間 3min);然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。

3. 血液可直接測定,或者適當稀釋后測定。

測定步驟:

1. 分光光度計預熱 30min,調節波長到 510 nm,蒸餾水調零。

2. 試劑三置于 37℃水浴中預熱 30 min。

3. 空白管:取 EP 管,加入 20μ L 蒸餾水,200μ L 試劑二,200μ L 試劑三,混勻后置于 37℃ 水浴中保溫 15min;加入試劑四 600μ L,混勻后于 510 nm 測定吸光度,記為 A 空白管。

4. 標準管:取 EP 管,加入 20μ L 標準品,200μ L 試劑二,200μ L 試劑三,混勻后置于 37℃ 水浴中保溫 15min;加入試劑四 600μ L,混勻后于 510 nm 測定吸光度,記為 A 標準管。

5.對照管:取 EP 管,加入 20μ L 上清液,200μ L 蒸餾水,200μ L 試劑三,混勻后置于 37℃ 水浴中保溫 15min;加入試劑四 600μ L,混勻后于 510 nm 測定吸光度,記為 A 測定管。

6. 測定管:取 EP 管,加入 20μ L 上清液,200μ L 試劑二,200μ L 試劑三,混勻后置于 37℃ 水浴中保溫 15min;加入試劑四 600μ L,混勻后于 510 nm 測定吸光度,記為 A 測定管。

注意:空白管和標準管只需測定一次。每個測定管設一個對照管。

AKP/ALP 活性計算:

1. 血液中 AKP/ALP 活力計算

活性單位定義:37℃中每毫升血液每分鐘催化產生 1μ mol 酚定義為 1 個酶活單位。

AKP/ALP 活力(μ mol/min /mL)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 反總] ÷V 樣÷T=6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)

2. 組織、細菌或細胞中 AKP/ALP 活性計算

(1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產生 1 μ mol 酚定義為 1 個酶活單位。

AKP/ALP(μ mol/min/mg prot)=[C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 反 總]÷(Cpr×V 樣)÷T=6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷Cpr

(2)按照樣本質量計算

活性單位定義:37℃中每克組織每分鐘催化產生 1 μ mol 酚定義為 1 個酶活單位。

AKP/ALP(μ mol/min/g 鮮重)=[C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 反 總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷W

(3)按照細菌或細胞數量計算

活性單位定義:37℃中每 104個細菌或細胞每分鐘催化產生 1 μ mol 酚定義為 1 個酶活單位。 AKP/ALP (μ mol/min/104 cell)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 反總]÷(細胞數量×V 樣÷V 樣總)÷T= 6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷ 細胞數量

C標準品:2μ mol/mL;V 反總:反應體系總體積(mL),1020μ L=1.02 mL; V 樣:加入反應 體系中上清液體積(mL),0.020mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間(min),15 min。

注意事項:

1.試劑二、試劑三和試劑四均需避光保存。

2.試劑四變藍綠色后不能再使用。

3.加入試劑四后必須立即混勻,否則顯色不*。

 

系列產品及價格

酯酶系列    
QS2000乙酰膽堿酯酶(AchE)測試盒可見分光光度法50管/48樣200
MS2000乙酰膽堿酯酶(AchE)測試盒微量法100管/96樣380
QS2001組織及血液酸性磷酸酶(ACP)測試盒可見分光光度法50管/24樣160
MS2001酸性磷酸酶(ACP)測試盒微量法100管/48樣310
QS2002組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)測試盒可見分光光度法50管/24樣160
MS2002堿性磷酸酶(AKP/ALP)測試盒微量法100管/48樣310
QS2003羧酸酯酶(CarE)測試盒可見分光光度法50管/48樣300
MS2003羧酸酯酶(CarE)測試盒微量法100管/96樣590




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